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MANUEL ANTÓNIO COIMBRA - Isolamento e Caracterização dos Polissacarídeos das Paredes Celulares da Azeitona, tese realizada para a obtenção do grau de doutor na especialidade de Química - ramo de Bioquímica, Universidade de Aveiro 1993

Índice e links para os ficheiros que constituem a tese
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Capas
Agradecimentos
Resumo
Abstract
Símbolos e Abreviaturas
Índice

PARTE I - INTRODUÇÃO

1- Considerações Teóricas
    1.1- A Parede Celular das Plantas
        1.1.1- Definição e Importância
        1.1.2- Estrutura
    1.2- Composição da Parede Celular das Plantas
        1.2.1- Principais Componentes da Parede Celular
        1.2.2- Substâncias Pécticas
        1.2.3- Hemiceluloses
        1.2.4- Celulose
        1.2.5- Proteínas e Glicoproteínas
        1.2.6- Compostos Fenólicos
        1.2.7- Polímeros da Parede Celular de Tecidos Lenhificados
            a) Glucuronoxilanas
            b) Lenhina
    1.3- Metodologia Aplicada ao Estudo das Paredes Celulares
        1.3.1- Preparação do Material das Paredes Celulares
        1.3.2- Extracção e Isolamento dos Componentes das Paredes Celulares
            a) Solubilização de Substâncias Pécticas
            b) Purificação de Substâncias Pécticas
            c) Solubilização de Hemiceluloses
            d) Purificação de Hemiceluloses
    1.4- A Azeitona
        1.4.1- Considerações Gerais
        1.4.2- Tipos de Estrutura Celular
        1.4.3- Métodos de Processamento
        1.4.4- Variações de Textura Durante o Amadurecimento
    1.5- Sumário e Âmbito do Trabalho

PARTE II - MATERIAL E MÉTODOS

2- Procedimento Experimental
    2.1- Azeitonas Utilizadas na Presente Investigação
    2.2- Equipamento .
    2.3- Ensaios com Resíduos Insolúveis em Álcool
        2.3.1- Preparação do AIR
        2.3.2- Preparação de AIR's de Diferentes Camadas da Polpa
        2.3.3- Preparação do CWM a partir do AIR (AIR/PAW)
        2.3.4- Extracção Sequencial do AIR/PAW
    2.4- Preparação do CWM da Polpa
        2.4.1- Azeitonas em Fresco
        2.4.2- Azeitonas Processadas
            a) Verdes
            b) Pretas
    2.5- Extracção Sequencial do CWM
        2.5.1- Azeitonas em Fresco
        2.5.2- Azeitonas Processadas
    2.6- Tratamento de RC2 com Clorito / Ácido Acético
    2.7- Extracção do CWM com Água Quente
    2.8- Preparação dos Tecidos Lenhificados do Caroço
        2.8.1- Preparação do CWM (CWMst)
        2.8.2- Deslenhificação do CWMst
        2.8.3- Extracção Sequencial da Holocelulose
    2.9- Extracção de Lenhina do CWMst com 1,4-dioxano
    2.10- Precipitação Gradual com Etanol
        2.10.1- Amostras Solúveis em Água
        2.10.2- Amostras Insolúveis em Água
    2.11- Cromatografia em Coluna
        2.11.1- Cromatografia de Troca Aniónica
            a) DEAE-Trisacryl M
            b) DEAE-Sephacel
        2.11.2- Cromatografia de Filtração em Gel
            a) Sephacryl
            b) Bio-Gel
    2.12- Fraccionamento de Glucuronoxilanas
        2.12.1- Utilização de Soluções de Cu (II)
        2.12.2- Variação do pH
    2.13- Hidrólise Ácida Parcial da Glucuronoxilana .
    2.14- Tratamento de Complexos Xilana-Xiloglucana com Xilanase .
    2.15- Determinação de Açúcares
        2.15.1- Método Colorimétrico Utilizando Fenol/Ácido Sulfúrico .
            a) Adaptação do Método Colorimétrico às Fracções da Cromatografia em Coluna
            b) Amostras Ricas em Compostos Fenólicos
        2.15.2- Método Colorimétrico para Determinação de Ácido Urónico
    2.16- Acetatos de Alditol
        2.16.1- Adaptação do Método de Selvendran et al. (1979)
        2.16.2- Adaptação do Método de Blakeney et al. (1983)
    2.17- Análise por Metilação
        2.17.1- Adaptação do Método de Hakomori (1964)
            a) Preparação do Anião
            b) Formação de Alcóxidos e Reacção de Metilação
            c) Hidrólise, Redução e Acetilação
        2.17.2- Adaptação do Método de Ciucanu e Kerek (1984)
            a) Reacção de Metilação
            b) Hidrólise, Redução e Acetilação
        2.17.3- Redução de Grupos Carboxílicos
    2.18- Quantificação de Hidroxiprolina
    2.19- Análise da Proteína Total
    2.20- Espectroscopia de RMN
    2.21- Espectros de Absorção da Lenhina no Ultra-violeta

PARTE III - RESULTADOS E DISCUSSÃO

3 - Isolamento e Análise dos Polímeros da Parede Celular da Polpa da Azeitona
    3.1- Experiências Preliminares com o AIR, AIR/PAW e CWM
        3.1.1- Preparação do AIR
        3.1.2- Análise de Diferentes Camadas da Polpa
        3.1.3- Preparação do CWM a partir do AIR
        3.1.4- Estudos Comparativos do CWM com o AIR/PAW
    3.2- Preparação do CWM
    3.3- Extracção Sequencial do CWM
        3.3.1- Extracções com CDTA e Na2CO3
        3.3.2- Extracções com Soluções de KOH
        3.3.3- Extracções a partir de RC1
    3.4- Fraccionamento dos Extractos
        3.4.1- Fraccionamento dos Extractos de CDTA e Na2CO3
        3.4.2- Fraccionamento dos Extractos de KOH e Clorito
    3.5- Análise das Ligações Glicosídicas
        3.5.1- Metilação do CWM, AIR-1 e AIR-4 .
        3.5.2- Fracções Extraídas com CDTA e Na2CO3
            a) Espectroscopia de RMN de 13C das Fracções NC1 e NC2
        3.5.3- Fracções Extraídas com 1M KOH
            a) Espectroscopia de RMN de 13C da Xilana da Fracção K10
        3.5.4- Fracções Extraídas com 4M KOH
        3.5.5- Fracções do Resíduo Rico em Celulose (RC1)
    3.6- Discussão Geral

4 - Estudo de Complexos da Parede Celular
    4.1- Caracterização dos Polímeros do Extracto de SDS 0,5%
        4.1.1- Precipitação com Etanol
        4.1.2- Fraccionamento dos Polímeros Precipitados em 65% de Etanol
        4.1.3- Fraccionamento dos Polímeros Precipitados em 80% de Etanol
        4.1.4- Análise das Ligações Glicosídicas por Metilação .
    4.2- Investigação Detalhada de Complexos Xilana-Xiloglucana
        4.2.1- Fraccionamento do Extracto de 1M KOH 1C (Hemicelulose B)
            a) Precipitação com Etanol
            b) Fraccionamento por Cromatografia de Troca Aniónica
            c) Fraccionamento por Cromatografia de Exclusão em Gel
        4.2.2- Análise das Ligações Glicosídicas por Metilação
        4.2.3- Tratamentos com Xilanase
            a) Cromatografia de Exclusão em Gel de Sephacryl S-400
            b) Análise das Ligações Glicosídicas
    4.3- Discussão Geral

5 - Efeito do Processamento na Parede Celular da Azeitona
    5.1- Preparação do CWM
        5.1.1- Azeitonas Processadas em Verde
        5.1.2- Azeitonas Processadas em Preto
        5.1.3- Efeito do Processamento na Preparação do CWM
    5.2- Extração Sequencial do CWM
        5.2.1- Azeitonas Processadas
            a) Azeitonas Processadas em Verde
            b) Azeitonas Processadas em Preto
            c) Efeito do Processamento na Extracção Sequencial do CWM
        5.2.2- Extracção do CWM de Azeitonas Frescas com Água Quente
    5.3- Fraccionamento dos Extractos
        5.3.1- Fraccionamento de Extractos Ricos em Substâncias Pécticas
            a) Extractos de CDTA
            b) Extracto Obtido com Água Quente
            c) Extractos de 0,5% SDS
        5.3.2- Fraccionamento dos Extractos Ricos em Glucuronoxilanas
        5.3.2- Fraccionamento dos Extractos Ricos em Xiloglucanas
            a) Azeitonas Processadas em Verde
            b) Azeitonas Processadas em Preto
    5.4- Análise das Ligações Glicosídicas
        5.4.1- Substâncias Pécticas
        5.4.2- Glucuronoxilanas
    5.5- Discussão Geral

6 - Isolamento e Caracterização dos Polímeros das Paredes Celulares dos Tecidos Lenhificados do Caroço da Azeitona
    6.1- Preparação do CWM
    6.2- Deslenhificação do CWMst
        6.2.1- Tratamento do CWMst com Clorito / Ácido Acético
        6.2.2- Tratamento do CWM com Dioxano:H2O:HCl
        6.2.3- Espectros de Absorção de Lenhina no Ultra-Violeta
    6.3- Extracção Sequencial da Holocelulose
    6.4- Fraccionamento dos Extractos
        6.4.1- Polímeros Solubilizados pelo Clorito
        6.4.2- Polímeros Solubilizados com 1,4-Dioxano .
        6.4.3- Hemicelulose B da Fracção Extraída com 0,5M KOH
        6.4.4- Hemicelulose A das Fracções Extraídas com 0,5M e 1M KOH
    6.5- Análise das Ligações Glicosídicas
        6.5.1- Metilação do CWM e da Holocelulose
        6.5.2- Complexos Xilanas-Polissacarídeos Pécticos
        6.5.3- Glucuronoxilanas
            a) Hidrólise Ácida Parcial
        6.5.4- Fracções da -celulose
    6.6- Discussão Geral

7 - Conclusões  

7 - Conclusions (English version)

PARTE IV - BIBLIOGRAFIA

NOTA: Quem pretender descarregar esta tese para um CD-Rom, pode imprimir a seguinte CAPA de CD.

Da página de:
Manuel A. Coimbra   mac#ua.pt (substituir # por @)
https://sweet.ua.pt/~f627